FlexiBac 

L’unité a mis au point une technologie originale et brevetée, appelée FlexiBac, pour générer 100% de baculovirus multi-recombinants en une seule étape.

Cette technologie repose sur l’utilisation d’ADN viral rendu non infectieux (par délétion de gènes essentiels) et répliqué dans des cellules de E. coli (par introduction dans le génome viral d’une origine de réplication bactérienne, mini-F). Ces ADN viraux non infectieux sont appelés BacMids.

Un ensemble de BacMids a été construit en supprimant des gènes essentiels de l’ADN viral. Des vecteurs de transfert spécifiques (pVT) sont générés et contiennent (i) un promoteur, (ii) une cassette d’expression permettant de produire la protéine d’intérêt et (iii) une copie fonctionnelle du gène essentiel délété dans le BacMid.

Au cours de la transfection de cellules Sf9 par un BacMid et des pVT, il se produit une recombinaison homologue entre l’ADN du BacMid et les pVT conduisant à la réparation des gènes essentiels et donc à la génération de baculovirus infectieux mono- ou multi-recombinants. Ce système permet la génération en une étape de 100% de baculovirus recombinants co-exprimant 1 à 6 gènes d’intérêt.

Principe de notre technologie brevetée FlexiBac

La modulation de l’expression de chaque protéine recombinante peut être obtenue en utilisant différents promoteurs présentant des modèles d’expression spécifiques tels que des promoteurs cellulaires, viraux précoces ou tardifs et des promoteurs ayant une activité de transcription basse ou élevée.